引言

糖尿病性心肌病是由糖尿病引起的一种新型心肌疾病。其发病机制不同于高血压性心脏病和瓣膜性心脏病，是糖尿病患者发病和死亡的重要原因。DCM可导致心脏结构和功能的异常改变，产生心绞痛、心力衰竭、心律失常等不良症状，降低患者的生活水平。目前治疗DCM的常用药物有肾素-血管紧张素-醛固酮系统抑制剂和β受体拮抗剂，但这些药物可能会引起低血压、心动过缓、传导阻滞等不良反应。因此，开发新的有效药物治疗扩张型心肌病是一项重要的任务。

1心肌细胞原代培养概述

原代培养的新生大鼠心肌细胞具有良好的搏动性和生理相似性，是研究心脏功能的首选细胞。在新生小鼠右心室心肌细胞原代培养实验中，采用出生1-3天的SD新生小鼠分离右心室，心肌组织用胶原酶ⅱ结合胰蛋白酶消化，差速贴壁法纯化。通过检测心肌细胞存活率，观察心肌细胞生长特性，cTnT免疫荧光染色鉴定心肌细胞纯度，得出新生大鼠右心室心肌细胞在培养第3天出现同步搏动，第7天心肌细胞频率保持在120-150次·min-1，更接近正常小鼠心率。建立了一种存活率高、搏动性好的乳鼠心肌细胞原代培养方法，通过培养可获得乳鼠右心室心肌细胞。影响心肌细胞原代培养的因素很多。在探索乳鼠心肌细胞原代培养的改良方法中，反复实践证明，消化酶的选择和消化方法是心肌细胞分离培养中最关键的因素。

2体外培养SD小鼠心肌细胞

制备小鼠心肌细胞，使用75%的酒精对SD小鼠进行浸泡消毒，消毒后行无菌开胸操作，剥离心包膜，取出心室组织置于4℃冰箱中预冷处理，采用PBS反复冲洗，剪碎后加入0．1%的胰蛋白酶(体积为心肌细胞的10倍)，置于恒温箱中，将温度设置为37℃，恒温处理10min，然后充分摇匀样品，在常温下放置2min，弃掉上清液，继续加入0．1%的胰蛋白酶，并置于恒温箱中，于37℃下孵育10min，收集上清溶液1000mL，置于离心机中，离心速度为3000r/min，离心半径为8cm，离心处理10min，弃去上清液，加入100%胎牛血清，并在细胞培养瓶内培养30min，随后将细胞样液添加至新的细胞培养板中持续培养。

3小鼠心肌细胞保护策略

3.1中藏药

西藏医学对心肌细胞的保护作用主要是抗氧化作用,主要表现在:首先,在心肌细胞再灌注过程中抑制自由基的产生,如白鸡尾酒,银杏,糖等。；其次,抑制由自由基如粉红色、次氧酸等的产生引起的脂质过氧化反应。；第三,保护超氧化还原酶(SOD)心肌的活性,相关研究表明,大豆中的总黄酮是主要的抗氧化活性位点;第四,药物本身含有SOD活性物质,可以直接去除野山等氧自由基;第五,抗外源性氧自由基的损伤,如松树等。总皂素可以增加心肌视网膜上钙泵的活性,并减少心肌细胞中的钙离子。胆碱,糖,泡沫等。它们还具有对内部Ca +流动的对抗作用。局部心脏系统refin-angiotensin(RAS)的激活参与冠状动脉心肌再灌注损伤的过程。Fergen作为β受体阻滞剂,可以在急性心肌缺血期间保护心肌细胞。五角大楼大大减少了由异丙肾上腺素引起的心肌超微结构损伤。在心脏缺血期间,血浆和组织中的白细胞介素1(IL-1),白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素8(IL-8)水平升高。皮尔根可以抑制由缺氧引起的心肌细胞IL-6分泌的增加。它有效地阻断了由损伤因子引起的心肌细胞的通路,并可能成为保护心脏的有价值的手段。胆汁可以在再灌注期间抑制兔心肌细胞的细胞的细胞活化。次氧酸对体外缺氧和缺氧损伤的小鼠心肌细胞具有作用。苹果的累积含量可以显着延长小鼠在异常压力和缺氧条件下的存活时间。

3.2白藜芦醇（Ｒｅｓ）

Res(Res)是葡萄,浆果和其他具有各种生物活性化合物的植物中发现的多酚。Res具有强大的心血管保护作用,可以中和活性氧,预防炎症,增加血管的分娩,抑制细胞死亡等。自噬是等效细胞中普遍存在的生命现象,通过清洁受损的器官来维持内部环境平衡和调节细胞存活,心肌营养缺乏,再灌注损伤可引起细胞自噬,心肌细胞可维持细胞稳定性,减少细胞损伤。锌是维持细胞正常生理功能所必需的微量元素,内源性锌的缺乏或缺乏会导致锌平衡失衡和细胞内信号通路的破坏。Res是一种天然的多酚化合物,存在于葡萄,男孩,花生和黄瓜中,可以缓解心脏病。自体吞噬是维持细胞稳定性的主要分子途径,是细胞的自适应过程,并且是由溶菌酶降解机制严格调控的。不同的实验模型表明,某些压力条件,如营养缺乏或缺氧,中度衰老促进细胞存活,过度衰老促进或加剧疾病,细胞材料异常分解,最终导致细胞死亡。ERS可以引发自噬,通过降解错误折叠的蛋白质来恢复内皮网络的稳定性。早期自噬前自噬与溶酶体融合,3mma是一种常见的早期自噬抑制剂,AMP激活通道能量传感器(AMPK)磷酸化是早期自噬的指标。作为AMP传感器,AMPK通过AMP和ATP比率的增加而激活,从而导致自噬前发射复合物中靶标AMPK的磷酸化。因此,AMPK磷酸化是早期自噬的指标。

结束语

近年来,具有心脏保护作用的中藏药种类和成分引起人们广泛关注,其对心肌细胞的抗氧化作用及机制研究进展迅速,但同时存在有效成分尚不明确,临床应用缺乏足够的实验理论基础,药理作用机制研究有待深入等问题。今后中藏药的研究应与现代医学技术相结合,考虑其作用特点,相信会为心肌保护及心血管疾病的治疗提供更多的思路。

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